رسالة ماجستير في كلية التربية للعلوم الصرفة تناقش دراسة بكتريولوجية وجزيئية لبكتريا E.coli المعزولة من انابيب القسطرة البولية في مستشفى بعقوبة التعليمي

      ناقشت كلية التربية للعلوم الصرفة بجامعة ديالى رسالة الماجستير الموسومة بـ (دراسة بكتريولوجية وجزيئية لبكتريا E.coli  المعزولة من انابيب القسطرة البولية في مستشفى بعقوبة التعليمي.) وتضمنت  الدراسة التي تقدم بها الطالب علي شاكر محمود جمع 152 مسحة من الادرار وقسطرة المسالك البولية  Catheters من المرضى الراقدين في وحدة الجراحة البولية في مستشفى بعقوبة التعليمي  للمدة من 15/7/2018 ولغاية 30/9/2018 لفئات عمرية مختلفة تراوحت بين 1-80 سنة لكلا الجنسين  بواقع  99 عينة من الذكور و 53 عينة من الاناث زرعت العينات على وسط أكار الدم ووسط اكار الماكونكي ، ثم اخضعت المزارع البكتيرية النامية إلى الفحوصات المجهرية والكيميوحيوية وبعد تشخيص البكتريا تم الحصول على 27 عزلة من البكتريا السالبة لصبغة كرام والمسببة لالتهابات المسالك البولية بواقع 15 عزلة وبنسبة 55.5% لبكتريا Escherichia coli ، و 7 عزلة بنسبة 26% لبكتريا Proteus mirabilis ، و 3 عزلة وبنسبة 11.1% لبكتريا Pseudomonas  aeruginosa ، و 2 عزلة وبنسبة 7.4% لبكتريا Klebsiella Pneumoniae. تم تأكيد التشخيص بالنسبة لبكتريا Escherichia coli باستخدام وسط أكار الأيوسين أزرق المثيلين Eosine Methylen Blue (EMB) وكذلك استخدام نظام  Vitek 2 compact system الذي اعطى نتائج تأكيدية لتشخيص عزلات بكتريا E.coli

وأوضحت نتائج الكشف عن بعض عوامل الضراوة لـ 27 عزلة  من عزلات البكتريا قيد الدراسة قابليتها على ﺇنتاج انزيم الهيمولايسين وقد كانت عزلات بكتريا Proteus mirabilis  منتجة للهيمولايسين بنسبة 57.1% تليها بكتريا  coli E. و  Pseudomona.aeruginosa بنسبة 53.3% و 33.3% على التوالي ، اما بكتريا  Klebiesella pneumoniae  فكانت غير منتجة للهيمولايسين . وأظهرت النتائج بان العزلات المنتجة للبكتريوسين كانت 9 عزلات اي بنسبة 33.3% وكانت موزعة على 5 عزلة من بكتريا وعزلة واحدة من  P.mirabilis و 4 عزلة من E.coli منتجة للبكتريوسين , اما بقية العزلات فلم تكن منتجة للبكتريوسين . تم الكشف عن قابلية  العزلات على تكوين الغشاء الحيوي بطريقة احمر الكونغو ﺇذ كانت عزلات  E.coli  و P.mirabilis  و P.aeruginosa منتجة له بنسبة %40 و 71.4% و 66.6% على التوالي , وعزلات K.pneumoniae كانت غير مكونة للغشاء الحيوي. وقد أظهرت نتائج عزلات  Proteus mirabilis قابليتها على ﺇحداث ظاهرة الانثيال Swarming   بنسبة  %100. وأوضحت قابلية البكتريا على الالتصاق بالخلايا الطلائية اذ اظهرت عزلات بكتريا E.coli القدرة على الالتصاق بنسبة 100% تليها بكتريا P.mirabilis بنسبة 85.71% اما بكتريا K.pneumoniae و P.aeruginosa فكانت النسبة لها 50% و 66.6 على التوالي .

 استخدمت طريقة الأقراص المتأخمة المحورة Disc approximation  للكشف عن انزيمات البيتالاكتاميز واسعة الطيف و أظهرت نتائج الدراسة إن بكتريا E.coli  منتجة لأنزيمات البيتالاكتاميز واسعة الطيف بنسبة 40% ونسبة بكتريا P.mirabilis  71.42% , نسبة بكتريا P.aeruginosa   33.3% , وعزلات K.pneumoniae بنسبة 50%. وتم الكشف عن انزيمات الميتالوبيتالاكتاميز المعدنية و أظهرت نتائج الدراسة إن بكتريا E.coli  منتجة لأنزيمات البيتالاكتاميز واسعة الطيف بنسبة 66.6% ونسبة بكتريا P.mirabilis و 71.42% , نسبة بكتريا P.aeruginosa  هي 66.6, وعزلات K.pneumoniae بنسبة 50%.

حدد التركيز المثبط الادنى MIC  لاثنين من المضادات الحياتية وهي  Cefotaxime و Ciproflaxcin  تراوحت القيم للمضادات مابين 2 – <1024 , واشارت نتائج اختبار الحساسية واختبار قيم التركيز المثبط الادنى الى وجود اختلاف كبير بينهما للعزلات المختلفة .

تم اجراء التفاعل التضاعفي لسلسلة الدنا PCR لعزلات E.coli  المقاومة لمضادات البيتالاكتام والبالغ عددها8  عزلات باستخدام  بادئ متخصص يستهدف التسلسل النوعي لجين  bla SHV ولجين bla CTX-M-15  ولجين  bla TEM-1   و Integron 1 و Integron 2  المقاومة لمجموعة مضادات البيتالاكتام وكانت نسبة ظهور الجينات في العزلات قيد الدراسة هي 100% و 100% و 100% و 75% و 0% على التوالي ، والبوادئ استعملت باعتماد ظروف خاصة بكل جين لغرض الكشف عن الجينات. تم تحديد تسلسل القواعد النتروجينية لنواتج تفاعل PCR لعينة واحدة لجينات bla CTX-M و  bla TEM وارسالها الى شركة Macrogen في كوريا الجنوبية وتم تحليل التسلسلات ومطابقتها مع بنك الجينات على موقع   NCBI blast.